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貼壁細胞的凍存

來源:admin  瀏覽量:  發布時間:2018-12-18 13:43:40


本視頻為普諾賽貼壁細胞傳代培養操作指南,對每一步操作都做了演示,以便實驗者更好地理解貼壁細胞傳代實驗過程。

貼壁細胞傳代實驗準備:
15mL離心管、T25細胞培養瓶、PBS緩沖液、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒滅菌;
細胞完全培養基、0.25%胰酶-0.02%EDTA4℃冰箱中取出后,復溫至室溫,備用。


貼壁細胞傳代實驗步驟:
1. 將準備好的培養基等物品用酒精消毒后放入安全柜中;
2. 從培養箱中取出待處理的細胞,在顯微鏡下觀察細胞狀態;
3. 用酒精消毒培養瓶,放入安全柜中;
4. 輕輕吸去細胞上清;
5. 加入2~3ml PBS緩沖液潤洗一次,吸去上清;
6. 加入1mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA,輕輕晃勻、覆蓋所有細胞后,置于37℃培養箱靜置消化;
7. 消化1min左右,在顯微鏡下觀察細胞消化情況;         
8. 消化完全后,加3ml完全培養基終止;
9. 按比例將細胞懸液分裝至培養瓶中;
10. 在顯微鏡下觀察傳代后的細胞密度及狀態;                 
11. 將培養瓶放入培養箱中培養。


注意事項:
1)培養過程中需維持細胞處于對數生長期,80%左右即可傳代,傳代比例請參照說明書建議;

2)消化時間不宜過長,大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化,難消化的細胞可分次消化,每次時間不超過5min;
3)培養過程中需要定期換液,一般細胞建議2~3天換液一次。

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