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凍存細胞收貨處理

來源:admin  瀏覽量:  發布時間:2018-12-18 13:44:08


本視頻為普諾賽凍存細胞收貨處理指南,對每一步操作都做了演示,以便實驗者在收到細胞后,能正確地處理和復蘇。


凍存細胞復蘇實驗準備:

將15mL離心管、T25細胞培養瓶、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒滅菌,細胞完全培養基提前30min放至37℃預熱備用。


凍存細胞收貨處理步驟

1. 收到細胞后,檢查外包裝是否完整;

2. 打開外包裝,取出保存于干冰中的細胞;

3. 檢查凍存管是否有破損,內容物是否融化;

4. 將取出的凍存管迅速放入37℃水浴鍋中融化;

5. 凍存管用75%酒精消毒,放入生物安全柜中;

6. 將5ml完全培養基加入15ml離心管中備用;

7. 將凍存管中的細胞懸液加入到準備好的培養基中,輕輕混勻;

8. 將15mL離心管放入離心機中離心,1000rpm/min(約200g)離心3-5min;

9. 將5ml完全培養基加入到T25培養瓶中備用;

10. 取出離心好的細胞,酒精消毒后放入安全柜中;

11. 輕輕吸去離心好的細胞上清;

12. 加入1ml完全培養基重懸細胞;

13. 將重懸好的細胞加入到準備的T25培養瓶中,輕輕混勻;

14. 在顯微鏡下觀察接種的細胞狀態及密度;

15. 將培養瓶放入37℃培養箱中培養。


注意事項:

1)操作凍存細胞時應使用手套、工作服和防護面具等,以避免事故的發生;

2)復蘇細胞時,應保持管蓋擰緊,將管蓋以下部分浸入37℃水浴中解凍,解凍過程要快;

3)部分比較脆弱的細胞可不用離心,直接用培養基稀釋細胞懸液后進行培養,但要及時通過換液等方式除去含DMSO的細胞凍存液;

4)請參照細胞說明書推薦的培養基和操作方法來培養細胞。

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